UROCULTIVO
EL urocultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un método excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparato urinario.
La combinación de piuria con bacteriuria considerable sugiere la presencia de una infección urinaria.
UTILIDAD CLINICA:
1. Cuando los síntomas indican una posible infección urinaria como: dolor y sensación de calor al orinar, así como urgencia frecuente de orinar.
2. Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque no muestre síntomas de infección.
3. En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en la orina que pueda causar algún problema al bebé.
2. Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque no muestre síntomas de infección.
3. En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en la orina que pueda causar algún problema al bebé.
RECOLECCION DE LA MUESTRA PARA CULTIVO: PRINCIPIO GENERALES:
· La muestra ideal es la primera de la mañana debido a que la cuenta bacteriana es mayor.
· Se requiere de 3 a 5 ml de orina reciente en un recipiente estéril, también se puede obtener mediante una sonda uretral, suprapubica o permanencia.
· Se requiere de 3 a 5 ml de orina reciente en un recipiente estéril, también se puede obtener mediante una sonda uretral, suprapubica o permanencia.
Las muestras para urocultivos no se toman de bolsas recolectoras de orina que forman parte del sistema de drenaje a través de una sonda.
· Se lleva la orina al laboratorio y se examina lo mas pronto posible, de no ser así, la orina se puede refrigerar hasta 2hrs antes de someterla a cultivo.
· En caso que el diagnostico sea de citomeglavirus, deberán mantenerse a temperatura ambiental, ya que la refrigeración destruye a los virus.
· Para establecer bacteriuriua, se toman 2 muestras sucesivas del chorro medio.
· Las muestras se deben de obtener antes de un tratamiento con antibióticos.
· El personal de salud instruye al paciente respecto de la técnica adecuada para recolectar la muestra.
· La muestra de orina se cubre y el recipiente se rotula y se incluye lo siguiente
información:
· Ficha de identificación, Nombre del medico, Diagnostico probable, Método de
recolección, Hora en que se obtuvo la muestra, Administración de líquidos forzados o intravenosos, Administración de sustancias quimioterapeuticas especificas.
· Se lleva la orina al laboratorio y se examina lo mas pronto posible, de no ser así, la orina se puede refrigerar hasta 2hrs antes de someterla a cultivo.
· En caso que el diagnostico sea de citomeglavirus, deberán mantenerse a temperatura ambiental, ya que la refrigeración destruye a los virus.
· Para establecer bacteriuriua, se toman 2 muestras sucesivas del chorro medio.
· Las muestras se deben de obtener antes de un tratamiento con antibióticos.
· El personal de salud instruye al paciente respecto de la técnica adecuada para recolectar la muestra.
· La muestra de orina se cubre y el recipiente se rotula y se incluye lo siguiente
información:
· Ficha de identificación, Nombre del medico, Diagnostico probable, Método de
recolección, Hora en que se obtuvo la muestra, Administración de líquidos forzados o intravenosos, Administración de sustancias quimioterapeuticas especificas.
TECNICAS PARA OBTENER UNA MUESTRA LIMPIA DE ORINA O DEL
CHORRO MEDIO
Toma de Muestras en Mujeres:
La muestra debe ser tomada preferentemente en el Laboratorio. Si ello no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa.
Debe hacerse una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la mano lo siguiente:
Debe hacerse una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la mano lo siguiente:
a) jabón desinfectante
b) agua hervida o agua estéril
c) gasa estéril o un paño acabado de lavar
d) el recipiente para tomar la muestra.
c) gasa estéril o un paño acabado de lavar
d) el recipiente para tomar la muestra.
Proceda primero a lavarse las manos y luego siéntese en el inodoro, lo más hacia atrás que pueda. Separe los labios genitales con una mano y mantenga los pliegues separados y proceda a asearse toda la zona genital con el jabón desinfectante.
Enjuague con abundante agua estéril y luego seque bien con
gasa estéril o con un paño limpio. Proceda a recoger la orina, destapando previamente el frasco SÓLO EN EL MOMENTO DE LA MICCIÓN y sin tocar con los dedos su interior, coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. No toque el interior del recipiente o de la tapa. Empiece a orinar la poceta y recoja en el frasco, sólo la muestra del chorro del medio es decir, no debe recoger
ni la primera, ni la última parte del chorro de orina. Tape muy bien el frasco y rotúlelo con su nombre.
gasa estéril o con un paño limpio. Proceda a recoger la orina, destapando previamente el frasco SÓLO EN EL MOMENTO DE LA MICCIÓN y sin tocar con los dedos su interior, coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. No toque el interior del recipiente o de la tapa. Empiece a orinar la poceta y recoja en el frasco, sólo la muestra del chorro del medio es decir, no debe recoger
ni la primera, ni la última parte del chorro de orina. Tape muy bien el frasco y rotúlelo con su nombre.
Tráigalo al Laboratorio lo más pronto posible, en un recipiente con hielo, cuidando de que no se bote el contenido.
Toma de Muestras en Hombres:
La muestra debe ser tomada preferentemente en el Laboratorio. Si ello no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa. Debe hacerse una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la mano lo
siguiente:
siguiente:
a) jabón desinfectante
b) agua hervida o agua estéril a temperatura ambiente
c) gasa estéril o un paño acabado de lavar
d) el recipiente para tomar la muestra.
Lavarse con jabón desinfectante primero las manos y luego la cabeza del pene empezando por la abertura uretral y continúe en dirección a usted, como muestra la ilustración, previa retracción del prepucio, si no está circuncidado.
Luego enjuagar bien con agua estéril o previamente hervida (a temperatura ambiente) y secar con gasa estéril.
Destape el frasco recolector sólo en el momento de la micción y sin tocar con los dedos su parte interna, coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. Comience a orinar en la poceta y recoja en el frasco sólo la muestra del chorro del medio, es decir, no debe recoger ni la primera ni la última parte del chorro de orina. Tapar bien el frasco, rotularlo con su nombre y traerlo al laboratorio lo más pronto posible, en un recipiente con hielo y cuidando de que no se bote. El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo.
Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.
Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.
A. Examen cuantitativo
Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kaas para
evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de
contaminación, se realiza de la siguiente manera:
evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de
contaminación, se realiza de la siguiente manera:
· Se homogeneiza la muestra mediante agitación.
· Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiológico, estériles.
· Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:100.
· Se deposita 1 ml. de cada dilución en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vacía un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45°. Mediante rotación suave, se favorece la distribución homogénea de la siembra.
· Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:100.
· Se deposita 1 ml. de cada dilución en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vacía un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45°. Mediante rotación suave, se favorece la distribución homogénea de la siembra.
Método de Kass
· Se incuban todas las siembras a 37° durante 24 a 48 horas.
Para calcular el número de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias.
Contadas éstas, basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la
cuenta total.
Para calcular el número de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias.
Contadas éstas, basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la
cuenta total.
Método del asa calibrada.
Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre o agar con CLED en una muestra de orina, sin centrifugar, empleando asa de platino calibrada (4 mm. de diámetro). Después de incubar las siembras a 37° durante 24 a 48 horas, se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que la asada de platino contiene 0.01 ml. de orina.
Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera:
· No hubo desarrollo microbiano.
· Menos de 10 000 colonias por ml.
· Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml.
· Más de 100 000 colonias por ml.
· No hubo desarrollo microbiano.
· Menos de 10 000 colonias por ml.
· Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml.
· Más de 100 000 colonias por ml.
Cuando se obtienen dos recuentos sucesivos con más de 100 000 colonias por ml., la
probabilidad de infección es de 80%, cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se
logra en tres recuentos sucesivos.
probabilidad de infección es de 80%, cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se
logra en tres recuentos sucesivos.
Por lo general, las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. Cuando el recuento revela valores intermedios, entre 10 0000 y 100 000 colonias /ml, el examen debe repetirse. Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas, si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml, ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas, diuresis acentuada, obstrucción uretral, infecciones crónicas e infecciones por cocos gram positivos.
b. Examen cualitativo
El estudio cualitativo, que conduce a la identificación del agente, se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada, en placas con agar-sangre, agar-CLED, agar de Levine o MacConkey.
Es recomendable el medio CLED, porque favorece el desarrollo de bacterias patógenas urinarias y permite la identificación de los microorganismos contaminados. Su contenido en cisteína y lactosa y su deficiencia en electrolitos facilitan, por una parte, el reconocimiento de colonias de bacterias y, por otra, inhiben el carácter invasor de las colonias de Proteus.
Así se facilita la identificación de estafilococos, bacilos difteromorfos, lactobacilos y otros agentes que pueden contaminar la orina.
Así se facilita la identificación de estafilococos, bacilos difteromorfos, lactobacilos y otros agentes que pueden contaminar la orina.
La identificación final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioquímicas y características serológicas. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control, y definir el estado de revivida o de reinfección. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo, del serotipo (particularmente en E. coli), del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. aeruginosa) y del antibiótico. Éste último se obtiene al comparar el antibiograma de cepas
aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia, se concluye que se trata de una misma cepa.
aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia, se concluye que se trata de una misma cepa.
* Métodos rápidos de diagnóstico.
· Existen varios procedimientos prácticos y económicos para el diagnóstico rápido de infecciones urinarias o de bacteriurias significativas. Son útiles para investigar grandes grupos de personas.
Estos métodos pueden ser microscópicos, químicos o de microcultivo.
· La coloración de un frotis de orina no centrifugada mediante el método de Gram constituye un índice práctico para diferenciar entre infección y contaminación urinarias.
Estos métodos pueden ser microscópicos, químicos o de microcultivo.
· La coloración de un frotis de orina no centrifugada mediante el método de Gram constituye un índice práctico para diferenciar entre infección y contaminación urinarias.
En efecto, la observación de un bacilo gram negativo por campo microscópico puede realizarse cuando la muestra contiene más de 100 000 bacterias por ml. Sin embargo, la dificultad de encontrar bacterias en frotis de orina por este método, provoca resultados falsos negativos. Menos confiable aun es el hallazgo de 20 o más bacterias gram negativas por campo microscópico de
sedimento urinario, aunque dicho número permita sospechar recuentos superiores a 100 000 microorganismos por ml.
sedimento urinario, aunque dicho número permita sospechar recuentos superiores a 100 000 microorganismos por ml.
· Los procedimientos químicos están basados en propiedades enzimáticas de las bacterias, que se pueden poner de manifiesto en la orina. Entre las pruebas se pueden mencionar:
catalasa, reducción de nitratos, reducción de trifeniltetrazolio e hipoglucosuria. Estos métodos, aunque rápidos y económicos, tienen el inconveniente de ser indirectos, basarse en propiedades metabólicas de las bacterias y no en su desarrollo y observación, y producir muchos falsos negativos.
catalasa, reducción de nitratos, reducción de trifeniltetrazolio e hipoglucosuria. Estos métodos, aunque rápidos y económicos, tienen el inconveniente de ser indirectos, basarse en propiedades metabólicas de las bacterias y no en su desarrollo y observación, y producir muchos falsos negativos.
Placas de agar McConkey y de agar CLED, donde ha crecido un Escherichia Coli en cultivo puro, con un recuento superior a 100.000 UFC/ml. (cultivo sembrado con asa calibrada de 1/1000).
SIGNIFICADO CLINICO:
Los siguientes microorganismos en titulación suficiente se consideran patógenos:
· Escherichia coli, Enterococcos, Neisseria gonorrhoeae, Klebsiella, Enterobacter, algunas especie de Serratia, Mycobacterium tuberculosis, Especies de Proteus, Pseudomona aeruginosa, Estreptococco hemolitico genralmente del gurpo B, Candida albicans y otras levaduras.
· Escherichia coli, Enterococcos, Neisseria gonorrhoeae, Klebsiella, Enterobacter, algunas especie de Serratia, Mycobacterium tuberculosis, Especies de Proteus, Pseudomona aeruginosa, Estreptococco hemolitico genralmente del gurpo B, Candida albicans y otras levaduras.
INTERFERENCIAS:
· Pacientes que estén recibiendo líquidos forzados, la orina esta tan diluida que la cuenta de los colonias disminuye por debajo de los 105/mililitro.
· La contaminación bacteriana puede provenir de:
· vello peri anal, bacterias localizadas debajo del prepucio, bacterias de las secreciones vaginales, de la vulva o de la porcion distal de la uretra, bacterias provenbientyes de las manos, pies o ropa.
· La contaminación bacteriana puede provenir de:
· vello peri anal, bacterias localizadas debajo del prepucio, bacterias de las secreciones vaginales, de la vulva o de la porcion distal de la uretra, bacterias provenbientyes de las manos, pies o ropa.
1- Siembra
La siembra debe realizarse de la orina sin centrifugar con un ansa calibrada, lo que permitirá obtener una estimación semicuantitativa del desarrollo microbiano.
Existen numerosos medios de cultivo para sembrar una muestra de orina. La elección del medio de cultivo debe contemplar la relación costo-beneficio, de modo de elegir la opción que permita la recuperación de la mayoría de los patógenos con el menor costo posible.
Para tal fin, el microbiólogo debe tener en cuenta cierta información básica:
i. El 70-80% de los urocultivos enviados al laboratorio resultan "negativos".
ii. El 85-90% de las IU son producidas por enterobacterias.
iii. De los gérmenes gram-positivos, los que se aislan con mayor frecuencia son
enterococos y estafilococos.
iv. El medio CLDE permite el desarrollo de bacilos gram-negativos, estafilococos y enterococos. Los medios de Levine, EMB o MacConkey permiten únicamente la recuperación de bacilos gram-negativos. La mayoría de los gérmenes (incluyendo estreptococos y corinebacterias) desarrollan en agar sangre, pero este medio no permite la recuperación de Haemophilus spp., ni neisserias patógenas (gonococos y muchas cepas de meningococos).
El agar chocolate posibilita la recuperación de todos los microorganismos mencionados anteriormente.
Teniendo en cuenta estos conceptos, el microbiólogo tiene varias opciones para la siembra racional de la orina.Siembra de acuerdo a la observación previa del sedimento. Este procedimiento ofrece la ventaja de cultivar el microorganismo en el medio más apropiado, tanto para su desarrollo,
como para su caracterización macroscópica (aspecto de la colonia, fermentación de lactosa, tipo de hemólisis, etc), por lo que posibilita orientar con mayor certeza el esquema inicial de identificación. La desventaja es que demanda más tiempo que la siembra "a ciegas".
como para su caracterización macroscópica (aspecto de la colonia, fermentación de lactosa, tipo de hemólisis, etc), por lo que posibilita orientar con mayor certeza el esquema inicial de identificación. La desventaja es que demanda más tiempo que la siembra "a ciegas".
Para aislar colonias de modo individualizado el medio en placas de Petri se inocula de la siguiente manera. Empleando un asa estéril se extiende la toma de la muestra a modo de estrías en el primer cuadrante.
Una vez realizada la extensión de la muestra dejamos incubar la muestra a 37° C durante 24 o 48 horas.
A continuación vamos a hacer un urocultivo en el cuál emplearemos un tubo a cuyo tapón hay unido una lengüeta. En cada cara de la lengüeta hay una medio de cultivo.
EL agar MacConkey es un medio selectivo-diferencial. Los microorganismos aislados de orina pueden ser fermentadores o no fermentadores de la lactosa. Se emplean medios diferenciales para distinguir unos de otros.
El medio MacConkey se utiliza para diferenciar los microorganismos intestinales fermentadores de la lactosa de los que no presentan esta propiedad.
Los microorganismos que fermentan la lactosa producen ácido láctico, que neutraliza la sal biliar y absorbe el colorante dando colonias rojizas. Los microorganismos que no fermentan la lactosa dan una reacción alcalina, no toman el rojo neutro y dan lugar a colonias incoloras.
Composición del agar MacConkey:
Taurocolato sódico 5 g.
Peptona 20 g.
Lactosa 10 g.
ClNa (opcional) 5 g.
Agar deshidratado 15 g.
Solución acuosa rojo neutro
al 1% 5-7 ml.
Agua destilada 1000 ml.
El otro medio de cultivo utilizado es diferente según la casa comercial. Uno de los más utilizados es el agar CLED. Según la casa comercial éste recibe diferentes nombres; en nuestro caso se llama Brolacyn. El medio CLED (Cistina-Lactosa-Deficiente en Electrolitos) se recomienda para bacteriología urinaria. La deficiencia en electrolitos evita el crecimiento invasivo de Proteus spp. , al mismo tiempo que se consigue una buena diferenciación de colonias para la mayor parte de los patógenos.
RESULTADOS
